Os seguintes tópicos explicam alguns termos relevantes à área de pesquisa de peptídeos:
Certificado de Análise
Cada peptídeo é fornecido com um certificado de análise específico ao lote, normalmente contendo a seguinte informação: sequência, peso molecular e pureza analisada por espectrometria de massa e perfil de HPLC. Análises adicionais (pureza ótica, composição de aminoácidos, umidade, solventes residuais ou conteúdo do peptídeo, etc.) podem ser efetuadas por solicitação do cliente e devida efetuação de pagamento adicional. Nós garantimos que a estrutura e a pureza do peptídeo correspondem às especificações descritas no certificado.
Contra-íon
Por causa de baixas concentrações de peptídeos utilizados na maioria dos sistemas de assay biológicos, possíveis efeitos do contra-íon podem ser frequentemente descartados. Os nossos peptídeos são fornecidos na forma de sais trifluoroacetatos (TFA), a não ser que o cliente solicite de maneira diferente. Peptídeos também podem ser fornecidos na forma de sais acetatos, contudo, os custos adicionais são consideráveis devido ao processamento adicional. A natureza do contra-íon pode afetar drasticamente a solubilidade do peptídeo.
Identidade – aplicável apenas para produtos do catálogo ou de qualidade GMP
A identidade dos nossos peptídeos é verificada através do processo de co-cromatografia, baseado nos nossos padrões internos, cuja identidade é comprovada mediante prévias e extensas análises.
Conteúdo
A maioria dos peptídeos contém side groups básicos e ácidos, implicando na presença de contra-íons (dos sais trifluoroacetatos). Levando em consideração que poucos peptídeos cristalizam, o método usual de preparação envolve uma etapa final de liofilização (freeze-drying). Portanto, além do peptídeo e do contra-íon, o liofilizado poderá conter um máximo de 5% de umidade residual. Antes de reconstituir o peptídeo, é necessário garantir que a quantidade a ser utilizada leva em consideração esta umidade residual. A concentração de peptídeo geralmente é de 75 a 80% mas pode ser tão baixa quanto de 50 a 60% em peptídeos com alta presença de resíduos de aminoácidos básicos. Por este motivo, ressaltamos a importância de observar a diferença entre o peso “bruto” do liofilizado e o conteúdo “neto” de peptídeo. Peptídeos com a finalidade de pesquisa são geralmente entregues com o peso “bruto” do liofilizado, enquanto GMP ou peptídeos de catálogo são entregues com o peso “neto” dos peptídeos, claramente marcado no certificado (unidades de peso).
Pureza
É importante notar que a “pureza do peptídeo” e o “conteúdo do peptídeo” não são sinônimos. Enquanto o conteúdo do peptídeo fornece informação sobre a relação entre o peptídeo e outros componentes do liofilizado, a pureza do peptídeo faz referência à pureza do peptídeo principal em relação à impureza dos outros peptídeos (se possível detectar). A pureza do peptídeo é calculada pela porcentagem-área de material UV-positivo (210 – 220 nm) eluído durante o pico principal do cromatograma HPLC. Os peptídeos do nosso catálogo são esboçados para o uso em sistemas de ensaios biológicos e produzidos para atingir um nível de pureza (HPLC) maior ou igual a 97%. O nível mencionado anteriormente representa o limite inferior aceito por nós, já que a maioria dos nossos peptídeos excede este nível de pureza. Este fato pode ser observado nos traços do HPLC fornecidos com o certificado de análise. Em raros casos, a natureza dos aminoácidos ou a estrutura terciária dos peptídeos impedem que o nível aceitável de pureza seja atingido a um preço comercial aceitável. Em tais situações, esta informação será claramente declarada no certificado de análise.
Peptídeos são substâncias biologicamente ativas. Portanto, certas precauções devem ser tomadas em consideração durante o manuseio e o armazenamento.
Manuseio e Armazenamento de Peptídeos
Peptídeos devem ser armazenados a uma temperatura de -18°C para estabilidade máxima. Como os peptídeos são geralmente higroscópicos, as amostras devem ser primeiramente aquecidas à temperatura ambiente em um dessecador antes de serem abertas e dos peptídeos serem pesados para o uso. A absorção de umidade poderá diminuir a estabilidade e reduzir o conteúdo total do peptídeo. Pese os peptídeos rapidamente e sele o frasco novamente para prevenir a absorção de umidade.
Solubilização e Armazenamento
Dissolva os peptídeos em um buffer apropriado: peptídeos ácidos em um buffer básico e peptídeos básicos em um buffer ácido. Se necessário, efetuar uma breve sonicação. No caso de peptídeos hidrofóbicos , é recomendável dissolvê-los em uma quantidade pequena de DMSO ou isopropanol (<5-10% do volume final) e diluí-los com o buffer apropriado. Peptídeos contendo Trp, Met, ou Cys requerem um cuidado especial para evitar oxidação. Água sem oxigênio ou agentes redutores poderão ser utilizados. Para o armazenamento, soluções de peptídeos devem ser aliquotadas e mantidas congeladas a -18°C. A maioria dos peptídeos contendo Trp, Met, Cys, Asn ou Gln tem um prazo de validade limitado. Portanto, o armazenamento a longo-prazo não é recomendado para peptídeos em solução.
Manuseio de Peptídeos em Solução
Peptídeos em solução são menos estáveis do que peptídeos em pó liofilizado. Degradação bacteriana pode ser um problema comum em peptídeos em solução. Para evitar este problema, peptídeos devem ser dissolvidos em solventes purificados esterilizados. Alternativamente, a solução de peptídeos pode ser filtrada (esterilizada) utilizando um filtro de 0.22µm. Frequentes ciclos de congelamento-descongelamento devem ser evitados. Soluções em estoque devem ser aliquotadas e armazenadas em temperaturas inferiores a -18°C.
Transporte
Devido a que a maioria dos peptídeos são estáveis como um liofilizado em temperatura ambiente, a refrigeração do produto durante períodos curtos de transporte não é necessária. Contudo, a exposição prolongada do produto à temperaturas mais elevadas deve ser evitada. Após o recebimento, é recomendado que o armazenamento a longo-prazo seja feito em temperaturas abaixo de -18°C. A maioria dos peptídeos armazenados desta maneira continuará estável por alguns anos. Caso um peptídeo exija precauções específicas durante o transporte, o cliente será informado.
Em caso de dúvidas, questões adicionais, ou para assistência técnica entre em contato conosco durante o nosso horário de funcionamento (8:00 – 16:00 GMT+1) por telefone: +43-316-68 17 11-0 ou envie a sua pergunta ao nosso email:
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Para o certificado GMP, favor efetuar o download do seguinte documento:
GMP_certificate_2006.pdf (160 kB)